乙酸激酶（ACK）测试盒检测原理与实验操作详解

乙酸激酶（Acetate Kinase, ACK）测试盒通常基于酶偶联反应与比色法进行检测。其基本原理是：ACK催化乙酸与ATP反应生成乙酰磷酸和ADP；随后，ADP在丙酮酸激酶（PK）作用下将磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）转化为丙酮酸；丙酮酸进一步在乳酸脱氢酶（LDH）催化下还原为乳酸，同时使NADH氧化为NAD?。该过程中，NADH在340 nm处的吸光度下降速率与ACK活性呈正相关，通过分光光度计测定吸光度变化即可计算酶活性。

实验操作一般分为以下步骤：

1. 试剂准备：按说明书将冻干粉或浓缩液复溶，配制工作液，部分组分需现配现用；
2. 样本处理：取适量组织或细胞样本，经匀浆、离心后获取上清液作为待测样品，必要时进行蛋白浓度测定以标准化；
3. 反应体系构建：在比色皿或96孔板中依次加入缓冲液、底物混合液、辅酶溶液及样本，最后启动反应；
4. 测定读数：立即置于分光光度计或酶标仪中，于340 nm波长下连续监测5–10分钟内吸光度变化；
5. 数据计算：根据标准曲线或摩尔消光系数，结合样本稀释倍数与蛋白含量，换算出单位定义下的酶活性值。

实验过程中需注意保持低温操作、避免反复冻融样本，并设置空白对照与平行重复，以确保结果可靠性。