为确保羧酸酯酶(CarE)测试结果的准确性和可靠性,在使用测试盒时需严格遵守以下操作规范与注意事项:
1.试剂准备与保存:所有试剂在使用前应恢复至室温(通常25℃),避免因温度差异影响反应速率。严格按照说明书要求配制工作液,确保溶解充分、混合均匀。未用完的试剂应立即密封,按要求(如-20℃避光)保存,防止反复冻融或光照导致活性下降。
2.样本处理:样本(如组织匀浆、血清等)的采集、处理和储存条件直接影响酶活性。操作过程需保持低温(冰上操作),避免剧烈震荡导致酶失活。匀浆介质和离心参数需标准化,以保证样本一致性。处理后的样本若不能立即检测,应分装后于-80℃短期保存,避免长期存放。
3.加样精确:使用高精度移液器进行加样,确保体积准确。每次更换样本或试剂时均需更换枪头,杜绝交叉污染。加样顺序应遵循说明书规定,特别是启动反应的底物或显色剂,需快速、同步加入。
4.反应控制:反应时间必须精确计时,从加入启动试剂开始计算。反应过程中避免震动或移动反应容器。比色法检测时,应在规定时间内完成吸光度读数,防止显色过度或褪色影响结果。
5.仪器校准:使用前确保分光光度计或酶标仪已预热并校准,波长设置正确。使用洁净的比色皿或微孔板,避免指纹或污渍干扰光路。
6.空白对照:务必设置并运行试剂空白和样本空白对照,用于扣除背景干扰,确保最终计算的准确性。
7.废弃物处理:实验产生的化学废弃物应按照实验室安全规程进行分类收集和处置。
严格遵循以上各项操作细节,是获得可靠、可重复实验数据的基础。任何环节的疏忽都可能引入误差,影响最终结论。请务必以严谨的科学态度对待每一步操作。